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그람 염색은 얼룩 색에 기초하여 그람 양성 또는 그람 음성 인 박테리아를 나타내는 차별적 염색 절차입니다. 아세톤 알코올은이 과정에서 색 분화를 제공하는 데 사용되는 시약 중 하나입니다. 그람 양성 박테리아는 두꺼운 펩티도 글리 칸 층을 갖고 자주색으로 염색되는 반면, 그람 음성 미생물은 펩티도 글리 칸 층을 거의 또는 전혀 갖지 않으며 분홍색으로 염색됩니다.
기본 얼룩 크리스탈 바이올렛
박테리아 샘플 슬라이드가 준비되면 크리스탈 바이올렛을 사용하여 샘플을 먼저 염색합니다. 이 시점에서 그람 양성균과 그람 음성균은 모두 자주색으로 나타납니다. 일반적으로 크리스탈 바이올렛은 30 초 동안 슬라이드에 적용되어 물로 과도한 얼룩을 씻어냅니다. 크리스탈 바이올렛은 펩티도 글리 칸 층에 약간 부착 될 수 있으므로 모든 1 차 스테인이 물로 세척되지 않을 수있다.
모르 단트 요오드
그런 다음 요오드를 1 분간 샘플에 첨가합니다. 그것은 염색 과정에서 염료를 고정시키는 역할을하는 살균제 역할을합니다. 요오드는 결정 바이올렛에 결합하고 단지 크리스탈 바이올렛 단독보다 그람 양성 박테리아 세포에서 발견되는 두꺼운 펩티도 글리 칸 층에 훨씬 잘 부착되는 불용성 복합체를 생성함으로써이 기능을 수행한다. 요오드를 첨가 한 후 물로 세척하는 단계는 없다.
탈색제-알코올
탈색제로는 아세톤 또는 에틸 알코올이 사용될 수있다. 알코올은 그람 음성 박테리아의 외부 세포막에서 발견되는 지질을 용해시켜 크리스탈 바이올렛-요오드 복합체가 더 얇은 펩티도 글리 칸 층으로부터 누출되도록한다. 알코올을 10 내지 20 초 동안 첨가하고; 모든 요오드가 세척되고 유출수가 무색이 될 때까지 슬라이드에 부어진다. 그람 염색 공정의이 시점에서, 그람 음성 박테리아는 무색 인 반면, 그람 양성 박테리아는 여전히 크리스탈 바이올렛을 유지합니다. 완료되면 탈색 효과를 멈추기 위해 슬라이드를 물로 헹구어 야합니다.
카운터 스테인-사 프라 닌
사 프라 닌은 무색 그람 음성균에 대한 가시성과 대비를 증가시키기 위해 첨가됩니다. 얼룩은이 박테리아가 현미경 아래에서 분홍색으로 나타납니다. 얼룩이 전체 샘플에 첨가되기 때문에 그램 양성 박테리아도 염색하지만 크리스탈 바이올렛이 어두울수록 더 밝은 사 프라 닌 핑크가 숨겨집니다. 일단 슬라이드 샘플이 약 1 분 동안 사 프라 닌으로 침수되면, 물은 박테리아 세포에 부착되지 않은 과도한 얼룩을 세척하는데 사용된다.