과학자와 기술자는 종종 현탁액에서 세포의 농도를 계산해야합니다. 예를 들어, 환자가 의사의 사무실에서 혈액을 채취하면 검사실은 특정 혈액량에서 백혈구의 양을 찾기 위해 특정 방법을 사용할 수 있습니다. 이를 통해 의사는 환자의 건강, 특히 면역 체계와 감염 또는 다른 질병과 싸우고 있는지에 대한 많은 정보를 얻을 수 있습니다. 이와 같은 검사는 혈액의 다른 많은 세포뿐만 아니라 척추 액 및 다른 체액, 예를 들어 정자의 정액 세포 수와 같은 생식력을 찾을 수 있습니다. 과학자들은 또한 생태 연구에서 산업 기술에 이르기까지 다양한 목적으로 박테리아, 효모 및 기타 미생물의 세포 농도를 계산합니다. 가장 일반적인 기술 중 하나는 많은 대학 생물학 수업에서도 가르치며 계산 실이라는 장치를 사용합니다.
세포 현탁액이 계수 챔버로 들어가기 전에 수천 또는 수백만 개의 세포를 포함 할 수 있기 때문에 희석이 필요할 수 있습니다. 이 경우 셀을 합리적으로 계산할 수 없습니다. 시료를 희석하려면 멸균 피펫을 사용하여 10 마이크로 리터의 세포 용액을 90 마이크로 리터의 희석제가 들어있는 테스트 튜브에 넣습니다. 희석제의 유형은 세포 유형에 따라 다릅니다. 잘 섞어주세요. 이 용액은 이제 초기 샘플보다 10 배 더 희석되었으므로 희석 계수는 10입니다.-1. 라벨을 붙입니다. 용액이 충분히 희석 될 때까지 매번 멸균 피펫을 사용하여이 과정을 여러 번 반복하십시오. 두 번째로 희석 한 경우 두 번째 테스트 튜브가 초기 용액보다 100 배 더 희석되었으므로 희석 계수는 10입니다.-2 등등.
계수 챔버에 대한 올바른 희석 계수를 결정하기 위해 여러 희석을 시도해야 할 수도 있습니다. 카운팅 챔버는 기본적으로 정밀한 깊이와 상단을 가로 질러 정확한 격자가 새겨진 매우 작고 명확한 직사각형 상자입니다. 혈구 계 또는 때로는 혈구 계라고도합니다. 그 목적은 계수 챔버에서 볼 때 세포가 겹치지 않고 균일 한 방식으로 그리드 전체에 분포되도록 현탁액을 충분히 희석시키는 것입니다. 세포를 함유하는 희석 된 현탁액을 계수 챔버의 웰로 피펫 팅하고, 모세관 작용을 통해 그리드 챔버로 침전 될 것이다. 카운팅 챔버를 현미경 스테이지에 놓고 저전력으로 봅니다.
격자는 더 작은 사각형으로 만들어진 사각형을 포함합니다. 대략 4 ~ 5 개의 정사각형을 선택하십시오. 그러나 4 개의 모서리와 중앙 정사각형과 같이 선택한 패턴으로 100 개 이상의 셀을 세어야합니다. 셀이 크면 큰 정사각형 일 수 있지만 셀이 작 으면 작은 정사각형을 대신 선택할 수 있습니다.
각 그리드 사각형의 비 체적은 챔버 제조업체를 세는 것에 따라 다를 수 있지만, 종종 챔버 깊이는 0.1 밀리미터이고, 큰 사각형의 면적은 1 평방 밀리미터이고, 작은 사각형의 면적은 0.04 평방 밀리미터입니다. 그러면 더 큰 사각형의 부피는 0.1 큐브 밀리미터입니다. 이 예에서는 5 제곱으로 총 103 개의 세포를 세고 희석 계수가 10이 될 때까지 초기 샘플을 희석했다고 가정합니다.-2.
각각의 그리드 정사각형의 부피가 0.1 입방 밀리미터이고 5를 세면, 계산 된 챔버의 총 부피는 0.5 입방 밀리미터이고 103 개의 셀이있었습니다. 1 입방 밀리미터로 두 배로 만들면 206 셀이됩니다. 1 입방 센티미터는 1 밀리리터에 해당하며 액체에 유용한 측정입니다. 입방 센티미터에는 1,000 입방 밀리미터가 있습니다. 따라서, 세제곱 센티미터 또는 밀리리터의 현탁액이 있었다면 206,000 (206 x 1,000) 세포를 세었을 것입니다. 이것은 방정식으로 보이는 것입니다.
그리드 제곱의 부피 × 계산 된 제곱의 수 = 계산 된 서스펜션의 총 부피
세포 수 ÷ 계산 된 현탁액의 부피 = 입방체 밀리미터 당 세포 수
세제곱 밀리미터 당 셀 수 × 1000 = 밀리 리터당 셀 수
현미경으로 초기 용액을 계산할 수 있도록 수행 된 희석을 고려해야합니다. 이 예에서 희석 계수는 10입니다.-2. 용액의 초기 농도를 계산하려면
밀리 리터당 세포 수 ÷ 희석 계수 = 세포 농도
이 예에서 밀리 리터당 셀 수는 206,000이며 10으로 나눕니다.-2 (0.01)은 초기 샘플에서 밀리 리터당 20,600,000 세포의 세포 농도를 제공합니다.