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샘플에서 미생물의 농도를 결정하는 고전적인 방법 중 하나는 샘플을 희석하고 플레이트에서 미생물을 키우고 콜로니를 세는 것입니다. 플레이 팅 된 미생물은 하나 이상의 세포로 구성된 콜로니 형성 단위에서 보이는 콜로니로 자라서 볼 수 있습니다. 박테리아는 플레이트 수를 사용하여 평가하는 가장 일반적인 미생물입니다. 식민지 수는 토양, 물 및 음식에서 미생물을 감지하고 계산하는 데 사용됩니다. 식민지를 세는 프로토콜은 정확하고 체계적인 접근 방식을 강조합니다.
희석 시료, 도금 및 배양
한천 플레이트에 단순히 미생물 샘플을 묻히면 개별 식민지가 서로 혼합되어 계산할 수없는 식민지 형성 단위가 너무 많습니다. 이 문제를 해결하려면 샘플을 액체 매질에 혼합하고 소량의 혼합물을 취하여 더 희석하십시오. 이 과정을 6-10 회 반복하십시오. 한천 판에 최종 희석액을 펴고 식민지를 세기 전에 4-7 일 동안 배양하십시오.
수동 계산
식민지를 계산하는 주요 트릭은 각 식민지 점을 한 번 계산하는 것입니다. 한 가지 접근법은 페트리 접시를 그리드 배경에 놓고 각 셀의 콜로니를 계산하여 모든 셀을 통해 체계적인 패턴으로 이동하는 것입니다. 페트리 접시 뒷면에 셀 수있는 식민지를 표시하는 것도 도움이 될 수 있습니다. 일반적으로 최소 3 개의 접시를 세어야합니다. 강력한 추론을 위해 30에서 300 개의 콜로니를 포함하는 플레이트 만 사용한다고 실험실과 제조업체에 컨설팅 서비스를 제공하는 회사 인 미생물 네트워크를 제안합니다. 계산하기에 너무 많거나 너무 적은 콜로니가있는 플레이트는 새로운 희석에서 다시 도금해야합니다.
자동 계산
인적 오류는 식민지를 수동으로 세는 데 소요되는 시간을 증가시킵니다. 정확성과 효율성을 모두 높이려면 페트리 접시를 자동 식민지 계산 장치에 넣으십시오. 자동 식민지 카운터는 접시의 이미지를 가져 와서 식민지를 배경에서 분리 한 다음 알고리즘을 사용하여 접시의 식민지를 계산합니다. 알고리즘은 두 개 이상의 콜로니가 가장자리에 닿을 때 콜로니를 구분하는 데 어려움이있을 수 있으므로 소프트웨어 개발이 진행중인 영역입니다.
계산을 더 복잡하게 만들기
콜로니 수로부터 미생물 밀도를 계산하는 정확도에는 몇 가지 제한이 있습니다. 콜로니 형성 단위는 단일 세포, 세포 사슬 또는 전체 세포 덩어리 일 수있다. 식민지는 하나의 세포를 나타내므로 식민지 수로 계산 된 농도는 낮을 수 있습니다. 다른 미생물들은 다른 성장 조건을 필요로하며, 플레이트상의 콜로니는 배양 조건 하에서 그 성장 배지에서 번성하는 미생물만을 나타냅니다. 또한 콜로니 계산은 죽은 샘플을 등록하지 않으므로 원래 샘플의 세포 농도가 필요할 때 고려해야 할 중요한 사항입니다.