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DNA
데 옥시 리보 핵산 및 단백질. DNA는 유전자라고하는 단위로 구성되며, 각 단위는 특정 RNA 또는 단백질 서열을 코딩합니다. 생물학적 구조와 기능, 진화, 질병 및 살아있는 시스템의 많은 다른 측면에 대해 배우기 위해 유전자를 연구합니다. 유전자를 자세히 연구하려면 DNA를 관심있는 세포에서 분리하고 정제해야합니다.
DNA 추출
단일 세포에서 DNA를 추출하여 연구 할 수 있지만 육안으로는 볼 수 없습니다. 스풀링에 충분한 양을 얻으려면 더 많은 셀을 사용하는 것이 좋습니다 (수백만 개).
정확한 프로토콜은 특정 샘플의 고유 한 특성을 설명하기 위해 상당히 다양하지만 일반적인 단계는 균질화, 용해, 분해, 분리 및 수집입니다. 절차는 작은 (샘플의 크기에 따라) 유리 또는 플라스틱 튜브에서 수행하는 것이 가장 좋습니다.
세포를 서로 완전히 분리하기 위해 일반적으로 시료를 혼합하거나 연마합니다. 이는 세포 성분이 다음 시약에보다 쉽게 접근 할 수있게합니다. 이어서 세제 또는 효소를 균질 물에 첨가하여 세포막 (및 세포가 진핵 생물 인 경우 핵막)을 용해시켜 DNA를 유리시킨다. 이 시점에서 DNA는 단백질, 지질, 탄수화물로 둘러싸여 있습니다.
단백질을 분해하여 DNA에 결합하지 않고 단백질의 수집을 방해하지 않기 위해서는 추가적인 효소 분해가 필요할 수 있습니다. 차가운, 순수한, 에틸 또는 이소 프로필 알코올을 첨가하여 DNA를 나머지 세포 내용물로부터 분리한다. DNA는 이러한 알코올에 용해되지 않으므로 알코올과의 접촉을 최소화하기 위해 응축됩니다. 응축 된 DNA를 원심 분리 또는 스풀링으로 수집합니다.
DNA 스풀링
스풀링에 의한 DNA 수집은 추출 과정에서 다량의 DNA를 얻을 때 효과적입니다. 순수한 DNA의 엉킴이 분명하게 보이기 때문에 훌륭한 시연 방법이기도합니다.
DNA를 스풀링하려면 분리 단계를 신중하게 수행해야합니다. 이전에 첨가 한 용해 시약 혼합물의 일부가 아닌 경우, 알코올 첨가 단계 전에 농축 염 용액 (염화나트륨)을 용액에 첨가해야한다. 차가운 알코올을 시험관의 측면에 천천히 부어 혼합을 피하면서 수용액의 상부에 층을 형성한다. 올바르게 수행하면 알코올은 짠 층 위에 자체 층을 형성합니다. 그런 다음 스풀링이 온다.
짠 층에서 DNA를 수집하려면 알코올 층이 튜브의 바닥에 닿을 때까지 유리 교반 막대를 조심스럽게 놓습니다. 두 레이어 사이의 인터페이스를 보면서 손가락 사이에서 막대를 천천히 돌립니다. 충분한 DNA가 존재하면 층들 사이의 계면에서 서로 밀집되어 유백색 반투명 덩어리를 형성합니다. 막대를 돌려 DNA를 감싸고 (스풀링 부분) 튜브에서 빼냅니다. DNA는 저장 또는 추가 분석을 위해 순수한 알코올의 다른 튜브로 옮겨 질 수 있습니다.