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겔 전기 영동은 DNA를 구성 분자 수준에서 분석 할 수있는 기술입니다. 이 DNA 시각화 방법에서, 샘플을 아가 로스 겔 매질에 놓고 전기장을 겔에 적용한다. 이로 인해 DNA 단편이 전기 화학적 특성에 따라 겔을 통해 다른 속도로 이동합니다.
에티 디움 브로마이드
이 시각화 기술을 위해, 에티 디움 브로마이드는 아가 로스 분말, EDTA 완충제 및 물과 혼합되어 전기 영동 전에 겔 매트릭스를 형성한다. 결과적으로, 에티 디움 브로마이드 분자는 매트릭스 전체에 균일하게 분산된다. 겔 웰이 각각의 DNA 샘플 및 추적 염료로 채워지면, 매트릭스를 가로 질러 큰 극성 화합물을 천천히 끌어 당기기 위해 전압이인가된다.
이 운동 동안, DNA 분자의 염기는 에티 디움 브로마이드 전하로 인해 입자에 일시적으로 결합하여 드래그합니다. 겔 전기 영동이 완료 될 때까지, 각각의 DNA 분자는 상당한 양의 에티 디움 브로마이드에서 픽업되었다.
자외선의 존재 하에서, 에티 디움 브로마이드는 형광을 나타낸다. 기술자는 젤을 가로 질러 특별히 보정 된 UV 광선을 비추는 반면, 기계는 빛나는 조각의 그림을 포착합니다.
메틸렌 블루
UV transilluminator를 사용할 수 없거나 실용적이지 않은 경우 기술자는 완성 된 아가 로스 젤을 전기 영동 된 DNA와 함께 메틸렌 블루 용액에 밤새 담가 두어 정상적인 상태에서 DNA를 볼 수 있습니다.
상당히 소수성 인 음이온을 갖는 염화물 염인 메틸렌 블루 분자는 전체 겔 매트릭스를 관통한다. 그러나 DNA 전체의 수소 결합으로 인해 스테인 분자가 축적됩니다. 이 증가 된 DNA 얼룩 밀도는 육안으로 볼 수있는 더 진한 파란색 음영을 생성합니다.
염료 추적
기술자들은 DNA 밴드의 상대적 크기를 넘어 추적 염료라고 불리는 화학 물질을 사용하여 각 조각의 절대 크기 (기본 쌍)를 측정 할 수 있습니다. 메틸렌 블루 또는 에티 디움 브로마이드를 첨가하지 않고 볼 수있는 브로 모 페놀 블루 및 크실렌 시아 놀과 같은 추적 염료는 각각 300 개의 뉴클레오티드 및 4,000 개의 뉴클레오티드로 구성된 DNA 단편과 동일한 속도로 전기 영동 동안 아 라고스 겔 매트릭스를 가로 질러 이동합니다. 전기 영동에서, 더 큰 DNA 단편은 작은 단편보다 느린 속도로 겔 매트릭스를 가로 질러 이동한다. 따라서, 염료를 추적하는 것은 DNA 단편의 가시성에 직접 영향을 미치지 않지만, 겔에서 DNA 단편의 위치를 이들 염료의 위치와 비교하면 기술자는 DNA 단편이 포함하는 대략적인 수의 뉴클레오티드를 "볼"수있다.