중합 효소 연쇄 반응의 첫 단계는 무엇입니까?

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• 녹는! 녹는!
• 마그네틱 지퍼
• 강한 자석은 더 단단히 붙어
• 중간 지점

중합 효소 연쇄 반응 (Polymerase chain reaction) 또는 PCR은 한 조각의 DNA를 많은 조각, 즉 지수 적으로 많은 조각으로 복사하는 기술입니다. 첫 번째 단계는 PCR에서 DNA를 가열하여 변성 시키거나 단일 가닥으로 녹이는 것입니다. DNA의 구조는 렁이 자기 끝이있는 로프 인 로프 사다리와 같습니다. 자석은베이스 페어라고 불리는 렁을 형성하기 위해 연결되어 분리되지 않습니다. DNA의 각 조각은 다른 온도에서 단일 가닥으로 녹습니다. DNA의 개별 부분에 의해 DNA 구조가 어떻게 결합되어 있는지 이해하면 다른 DNA 조각이 다른 온도에서 녹는 이유와 왜 그런 고온이 필요한지에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다.

녹는! 녹는!

PCR의 첫 번째 단계는 이중 가닥 DNA가 단일 가닥 DNA로 분리되도록 DNA를 녹이는 것입니다. 포유류 DNA의 경우,이 첫 번째 단계는 보통 대략 섭씨 약 95도 (약 200 화씨)의 열을 포함합니다. 이 온도에서 A-T와 G-C 염기쌍 사이의 수소 결합 또는 DNA 래더의 렁이 이중 가닥 DNA의 압축을 풀면서 분해됩니다. 그러나 온도는 단일 가닥 또는 사다리의 기둥을 형성하는 인산염 설탕 백본을 파괴하기에 충분히 뜨겁지 않습니다. 단일 가닥의 완전한 분리는 프라이머라고하는 짧은 DNA 단편이 단일 가닥에 결합 할 수 있도록 냉각하는 PCR의 두 번째 단계를 위해 준비합니다.

마그네틱 지퍼

DNA가 섭씨 95 도의 고온으로 가열되는 한 가지 이유는 DNA 이중 가닥이 길수록 더 오래 머무르기를 원하기 때문입니다. DNA 길이는 해당 DNA 조각에서 PCR에 대해 선택된 융점에 영향을주는 한 가지 요소입니다. 이중 가닥 DNA의 A-T 및 G-C 염기쌍은 이중 가닥 구조를 함께 유지하기 위해 서로 결합한다. 두 개의 단일 가닥 사이의 연속적인 염기쌍이 더 많이 결합할수록, 그들의 이웃도 더 많이 결합하기를 원하며, 두 가닥 사이의 인력이 강해진다. 작은 자석으로 만든 지퍼와 같습니다. 지퍼를 닫을 때 자석은 자연스럽게 지퍼를 잡고 지퍼 상태를 유지합니다.

강한 자석은 더 단단히 붙어

관심있는 DNA 단편에 대해 선택하는 용융 온도에 영향을 미치는 다른 요인은 해당 단편에 존재하는 G-C 염기 쌍의 양입니다. 각 기본 쌍은 유치하는 두 개의 미니 자석과 같습니다. G와 C로 만든 쌍은 A와 T 쌍보다 훨씬 더 매력적입니다. 따라서 다른 단편보다 G-C 쌍이 더 많은 DNA 조각은 단일 가닥으로 녹기 전에 더 높은 온도를 필요로합니다. DNA는 자연적으로 260 나노 미터 파장의 자외선을 정확하게 흡수하며 단일 가닥 DNA는 이중 가닥 DNA보다 더 많은 빛을 흡수합니다. 따라서 흡수되는 빛의 양을 측정하는 것은 이중 가닥 DNA가 단일 가닥으로 얼마나 많이 녹아 있는지 측정하는 방법입니다. G-C 및 A-T 염기 쌍의 "자기 지퍼"효과는 온도 증가에 대해 플롯 팅 된 이중 가닥 DNA의 흡광도 그래프가 직선이 아닌 S 자형이되도록 S 자형이되도록하는 것이다. S의 곡선은 기본 쌍이 분리하기를 원하지 않기 때문에 열에 작용하는 팀워크 저항을 나타냅니다.

중간 지점

DNA 길이가 단일 가닥으로 녹는 온도를 용융 온도라고하며, 약어는 "Tm"으로 표시됩니다. 이는 용액에서 DNA의 절반이 단일 가닥으로 녹은 반면 다른 절반은 온도입니다. 여전히 이중 가닥 형태입니다. 녹는 온도는 DNA 조각마다 다릅니다. 포유 동물 DNA는 G-C 함량이 40 %이며, 이는 염기쌍의 나머지 60 %가 As 및 Ts임을 의미한다. 그것의 40 % G-C 함량은 포유류 DNA가 섭씨 87도 (약 189 화씨)에서 녹게한다. 그렇기 때문에 포유류 DNA에서 PCR의 첫 번째 단계는 섭씨 94도 (201 화씨)로 가열하는 것입니다. 녹는 온도보다 7도 더 뜨겁고 모든 이중 가닥이 단일 가닥으로 완전히 녹습니다.