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고성능 액체 크로마토 그래피는 혼합물의 실험실 분석을위한 기술입니다. 컬럼을 통해 혼합물 샘플을 추진하기 위해 단순히 중력이 아닌 고압을 사용하는 효율적인 유형의 크로마토 그래피입니다. 시료를 주입 한 다음, 높은 압력을 포함한 펌프는 시료를 포장 된 컬럼을 따라 이동시켜 개별 구성 요소로 분리합니다. 그런 다음이 분리를 검출기로 분석하여 결과를 얻습니다.
주사 부위
HPLC에 주사하기 위해서는, 샘플을 극성 액체 용매, 바람직하게는 알려진 HPLC 스펙트럼을 갖는 용매에 용해시켜 그 데이터를 샘플과 구별 할 수 있어야한다. 샘플이 포함 된 액체 용액을 기기에 넣고 컬럼으로 보냅니다. 주사 부위의 실제 위치는 기기 브랜드에 따라 다릅니다. 대부분의 경우 주사 과정이 자동화되지만 경우에 따라 실험실 작업자는 작은 주사기 바늘을 사용하여 샘플을 주사해야합니다.
펌프 부품
HPLC 장치의 펌프 구성 요소는 컬럼을 통해 샘플을 추진하는 압력을 제공하기 때문에 필요합니다. 펌프 강도는 다양하지만 강력한 펌프는 최대 6,000psi 또는 제곱 인치당 파운드의 압력을 생성 할 수 있으며 이는 샘플을 주입 한 후에 적용됩니다. 이를 통해 시료는 중력 만 사용하여 떨어지는 것보다 컬럼을보다 빠르고 효율적으로 통과 할 수 있습니다.
열 설명
펌프에 의해 컬럼을 통과하는 샘플의 증가 된 속도는 단순한 액체 크로마토 그래피에 사용 된 것과는 다른 유형의 컬럼을 사용할 수있게한다. 컬럼 내의 충전재는 훨씬 작은 입자 크기를 가질 수 있으며, 이는 표면적을 증가시키고 따라서 샘플과 컬럼의 상호 작용을 돕는다. 대부분의 HPLC 컬럼은 극성을 통해 작동합니다. 샘플을 극성 용매에 용해시키고, 컬럼은 주로 비극성 탄화수소로 구성된다. 시료 분자의 극성 부분은 주로 용매와 상호 작용하기 때문에 컬럼을 매우 빠르게 통과하는 반면, 비극성 성분은 컬럼에 남아 컬럼 성분과 약한 상호 작용을 형성합니다. 따라서 샘플 구성 요소는 대부분의 극성에서 가장 비극성으로 순서대로 컬럼에서 분리됩니다.
검출기 기능
검출기는 사용중인 HPLC 기기의 유형에 따라 다릅니다. 그러나 대부분 동일한 기본 방식으로 작동합니다. 분리 된 샘플 구성 요소가 컬럼에서 분리 될 때 자외선 소스가 빛납니다. 대부분의 유기 화합물은 일정량의 빛을 흡수하므로, 적용된 광선을 통과 할 때 탐지기는 빛이 얼마나 많이 흡수되는지 알아낼 수 있습니다. 또한 검출기는 컬럼에서 나온 순서에 따라 구성 요소 보유 시간을 기록합니다. 이 출력은 샘플 영역의 정확한 특성을 결정하기 위해 피크 면적을 기준으로 분석 될 수 있습니다.