Western Blot의 장점 및 단점

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• 감도 : 감도
• 장점 : 특이성
• 단점 : 허위 또는 주관적인 결과가 발생하기 쉽다
• 단점 : 높은 비용과 기술 요구

주어진 샘플에서 특정 단백질을 찾아내는 데 사용되는 분석 기술인 Western blot은 효소 또는 형광 표지 된 1 차 항체가 특정 항원에 결합하는 능력을 사용합니다. 겔 전기 영동으로 시작한 다음 3 단계로 막 블로 팅 및 항체로 프로빙합니다. 단백질 검출은 직접적 또는 간접적 일 수 있고, 후자는 일차에 대해 지시 된 표지 된 이차 항체를 사용한다. 웨스턴 블롯은 일상적인 단백질 분석 기술로 받아 들여지지 만 이점뿐만 아니라 한계가 있습니다.

감도 : 감도

웨스턴 블롯에 유리한 가장 큰 논쟁 중 하나는 감도입니다. 시료에서 최소 0.1 나노 그램의 단백질을 검출 할 수있는 능력으로 인해이 기술은 이론적으로 효과적인 초기 진단 도구로 작용하여 환자 시료의 바이러스 또는 박테리아로부터의 아주 작은 면역 원성 반응까지도 감지 할 수 있습니다. 간접적 인 웨스턴 블롯은 이미징 시스템에 의해 검출 된 신호의 강도를 증폭시키는 이차 항체의 능력으로부터 이러한 감도를 더욱 강화시킨다. 감도가 높을수록 테스트에 필요한 항체 수가 적어 실험실 비용이 크게 줄어 듭니다.

장점 : 특이성

웨스턴 블롯 기법은 두 가지 큰 기여 요인에 대한 특이성을 가지고 있습니다. 먼저, 겔 전기 영동은 시료를 크기, 전하 및 형태가 다른 단백질로 분류합니다. 겔 내에 형성된 밴드가 이미 관심있는 단백질 또는 폴리펩티드의 크기에 대한 실마리를 제공하기 때문에,이 과정 자체는 검출을 향한 ​​큰 단계이다. 항체-항원 상호 작용의 특이성은 두 번째 큰 요인이된다. 특정 항체는 특정 단백질에 대한 친화력을 나타 내기 때문에이 프로세스는 300,000 개의 다른 단백질의 혼합물에서도 표적 단백질을 선택적으로 검출 할 수 있습니다.

단점 : 허위 또는 주관적인 결과가 발생하기 쉽다

민감도와 특이성에도 불구하고 웨스턴 오점은 여전히 ​​잘못된 결과를 생성 할 수 있습니다. 항체가 의도하지 않은 단백질과 반응 할 때 위양성 결과가 나타납니다. 이는 HIV 검사를받는 환자가 결핵 또는 여러 기생충 감염을 겪을 때 자주 발생합니다. 다른 한편으로, 더 큰 단백질이 막으로 적절히 전달되기에 충분한 시간이 주어지지 않으면, 위음성은 쉽게 발생할 수있다. 부적절한 블로 팅 및 처리는 종종 기울어 지거나 희미 해 지거나 여러 개의 밴드를 만들어 테스트 결과가 기술자의 해석에 따라 달라집니다.

단점 : 높은 비용과 기술 요구

웨스턴 블롯의 비용은 태그 항체, 숙련 된 분석가 및 실험실 장비에 대한 대규모 개별 지출의 복합입니다. 섬세한 공정의 웨스턴 블로 팅은 시료 성분을 올바르게 식별하기 위해 모든 단계에서 정밀성을 요구합니다. 전체 공정에서 시약 농도 또는 배양 기간에 약간의 오차가 발생할 수 있습니다. 마지막으로, 화학 발광, 형광, 방사성 또는 레이저 감지 시스템과 같은 감지 및 이미징에 필요한 장비는 일반 미생물 장치에 비해 너무 비쌀 수 있습니다.