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분광 광도계는 용액에서 단백질과 같은 특정 화합물의 농도를 결정하는 데 사용됩니다. 일반적으로 샘플로 채워진 큐벳을 통해 빛이 비 춥니 다. 샘플에 의해 흡수되는 빛의 양이 측정됩니다. 화합물은 서로 다른 스펙트럼 범위의 빛을 흡수하므로 분석을 위해 올바른 파장을 설정해야합니다. 분광 광도법을 통해 알려지지 않은 샘플의 농도를 계산하는 방법은 여러 가지가 있지만 참조 표준을 사용하면 최상의 정확도를 얻을 수 있습니다. 또한 표준은 분광 광도계가 오작동하는지 또는 분석에 다른 문제가 있는지를 나타냅니다.
직선 방정식을 통한 계산
분석 시작시 참조 표준을 분석하십시오. 표준은 알려진 농도이며 장비를 교정하고 정확도를 확인하는 데 사용됩니다. 모든 샘플은 표준의 작동 범위 내에 있어야합니다. 그렇지 않은 경우 샘플을 희석하거나 표준 농도를 높여야합니다.
표준 농도 및 흡광도 측정 값으로 산점도 또는 선 그래프를 작성하십시오. 농도는 y 축에, x 축에 대한 흡광도입니다. 예를 들어 표준은 1ppm, 2.5ppm 및 5ppm입니다. 주어진 흡수율은 1 ppm = .25, 2.5 ppm = .5 및 5 ppm = .75였다.
그래프에 방정식을 표시하도록 추세선의 서식을 지정하십시오. 방정식은 공식 y = mx + b를 보여줍니다. 예를 들어, 2 단계의 표준을 사용하면 방정식은 y = .1224x + 0.1531입니다. 대부분의 추세선은 0으로 차단되지만 분석 방법과 R- 제곱 값에 따라 달라집니다.
알려지지 않은 샘플을 분석하고 흡수 판독 값을 기록하십시오.
방정식 (y = mx + b)을 사용하여 샘플의 농도를 결정하십시오.