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세포보다 훨씬 작은 DNA 단편의 길이를 측정 할 때 미생물 학자에게는 트릭이 필요하며 가장 편리한 방법은 젤 전기 영동입니다. 이 방법은 DNA 단편이 하전된다는 사실에 의존하며, DNA의 이중 나선 구조의 발견을 담당 한 X- 선 결정학과 같은 고가의 방법에 대한 대안입니다.
겔 전기 영동 작동 원리
DNA 분자는 전하가 있기 때문에 전류의 영향을받습니다. 그것들을 중성 젤에 넣고 젤에 전류를 넣으면 분자는 양극 (양극)으로 이동합니다. 크기가 다른 DNA 분자는 같은 전하를 가지고 있기 때문에 작은 분자는 더 빨리 이동하므로이 과정은 분자를 알려진 크기의 샘플과 비교할 수있는 밴드로 분리합니다.
기본 전기 영동 절차
겔은 일반적으로 완충액에서 가열 될 때 반고체의 약간 다공성 인 겔인 다당류 인 아가 로스로 제조된다. 한쪽 끝에서 겔은 우물이라고 불리는 작은 움푹 들어간 부분을 형성합니다. 여기서 연구원은 DNA 래더라고하는 알려진 길이의 참조 샘플과 함께 연구중인 DNA 샘플을 배치합니다. 래더 단편의 길이는 X- 선 결정학과 같은 다른 방법에 의해 미리 결정되었다.
젤이 전도성 용액에 담그고 전압이 가해지면 조각이 젤을 통해 이동하기 시작합니다. 작은 것부터 큰 것, 느리고 느린 것입니다. 그들은 결국 크기에 따라 스펙트럼과 같은 밴드로 형성됩니다.
이것이 발생하면 연구원은 전원을 끄고 젤에 DVA 결합 염료를 주입하고 자외선 아래에서 표본을 검사합니다. 래더를 참조로 사용하여 연구원은 가시 밴드에서 각 조각의 크기를 결정할 수 있습니다. 밴드 만 보입니다 – 개별 DNA 조각은보기에 너무 작습니다.
알 수없는 조각의 길이 결정
표본의 모든 밴드가 사다리의 밴드와 쌍을 이루는 것은 아닙니다. 따라서 이러한 알 수없는 조각의 크기를 결정하기 위해 과학자들은 보통 그래프를 그립니다. x 축에는 래더의 각 밴드가 밀리미터 단위로 이동 한 거리가, y 축에는 각 밴드의 크기가 표시됩니다. 점이 곡선으로 연결되면 해당 대역이 이동 한 거리를 밀리미터 단위로 측정 한 후 모든 대역의 크기를 곡선에서 외삽 할 수 있습니다.