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HPLC (고성능 액체 크로마토 그래피)는 화합물을 분리하고 식별하는 데 사용되는 실험실 기술입니다. 분리하기 위해 용액에서 화합물의 다른 극성에 의존하는 컬럼 크로마토 그래피 유형입니다. HPLC는 압력을 사용하여 용액을 컬럼을 통해 더 빨리 통과 시키므로 더 빠르고 때로는 정확한 결과를 생성하기 때문에 표준 컬럼 크로마토 그래피와 다릅니다. 목표는 컬럼에서 화합물을 분리하고 개별적으로 종료되도록하는 것입니다.
동시 용출
HPLC의 속도 및 상이한 극성의 화합물에 의존하기 때문에, 유사한 구조 및 극성을 갖는 2 개의 화합물이 동시에 또는 거의 동시에 크로마토 그래피 장치를 빠져 나갈 수있다. 이것을 공동 용출이라고합니다. 동시 용출은 혼합물의 어느 부분이 어느 시점에서 용리되는지를 정확하게 결정하게한다.
흡착 된 화합물
HPLC는 일반적으로 다른 재료로 만들어진 비드로 채워진 유리 컬럼을 사용합니다. 컬럼을 통과하는 혼합물에는 비드에 다른 강도로 결합하는 화학 물질이 있습니다. 극성의 유사성에 따라 달라지는 결합 강도는 방출되기 전에 화학 물질이 비드에 얼마나 오래 결합 하는지를 결정합니다. 일부 화합물은 본질적으로 컬럼의 비드에서 방출되지 않고 컬럼을 나가는 용액에서 측정되지 않도록 너무 강하게 결합합니다.
비용
일반적인 실험실 분리 기술로는 분석법 또는 분리 방법을 개발 한 다음 해당 분석법을 구현하여 개별 화합물을 용액에서 분리합니다. 그러나 이로 인해 일반적으로 절차를 거쳐야하는 여러 솔루션이 생성되어 복잡성이 기하 급수적으로 증가합니다. HPLC가 종종이 프로세스를 단순화하고 가속화 할 수 있지만, HPLC 장치를 개발하는 비용은 엄청날 수 있습니다. HPLC 장치를 개발하는 것은 훨씬 효율적이지만 화합물 분리를위한 다른 분석법을 개발하는 것보다 훨씬 비용이 많이 듭니다. 이것은 많은 소규모 개인 소유 실험실에서 재정적으로 실행되지 않습니다.
복잡성
HPLC는 단순한 화합물을 분리하는 데 사용될뿐만 아니라 세포 혼합물에서 특정 단백질을 분리하는데도 사용됩니다. 이 경우 컬럼의 비드는 일반적으로 수집해야하는 단백질에 특이적인 항체로 코팅됩니다. 단백질은 항체에 결합하고 나머지 용액은 컬럼을 통과 한 후 단백질은 다른 용액을 사용하여 방출되고 수집됩니다. 이를 위해서는 고도로 숙련 된 기술자가 항상 컬럼을 모니터하고 프로세스가 계획대로 정확하게 실행되고 있는지 확인해야합니다.