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HPLC (고성능 액체 크로마토 그래피)로 작업 할 때는 신뢰할 수있는 품질의 결과를 보장하기 위해 우수한 보정이 필수적입니다. HPLC 기기의 올바른 보정은 적합한 보정 표준을 만드는 것으로 시작합니다. 대부분의 경우, 교정에는 실제로 교정 곡선이라고하는 것을 생성하기 위해 농도가 증가하는 일련의 표준이 필요합니다. 이것은 시험되는 화학 물질의 농도와 HPLC 검출기의 반응 사이의 관계를 나타내는 플롯 된 선 및 관련 방정식입니다.
HPLC를 사용하여 테스트하려는 화학 물질 ( "분석 물질")을 결정하십시오. 예를 들어, 과당 함량에 대해 일련의 청량 음료를 테스트 할 수 있습니다.이 경우 과당이 분석 물이됩니다.
적절한 순도의 분석 물질을 일정량 확보하십시오. 일반적으로 순도는 99 % 이상이어야하며 분석가는 유명한 화학 공급 업체에서 구입해야합니다. 예를 들어 과당의 경우 식료품 점이 아닌 화학 업체에서 순수 과당을 구매합니다.
HPLC에서 테스트하려는 샘플에서 분석 물의 최대 및 최소 예상 농도를 결정하십시오. 청량 음료의 경우, 음료의 라벨을 검사하고 테스트 할 음료 중에서 가장 낮은 과당 함량을 결정합니다. 초기 샘플 (소프트 드링크)은 분석 준비 중 (사용중인 HPLC 방법에 따라) 희석되거나 달리 조작 될 수 있으므로 실제로 HPLC에 주입 된 샘플의 분석 물 농도가 변경 될 수 있습니다. 반드시 고려해야하는 것은 HPLC에서 실행되는 샘플의 분석 물 농도입니다.
보정 표준을 구성하기 위해 분석 물을 용해시킬 용매를 결정하십시오. 이 용매는 상대적으로 넓은 범위의 농도 (적어도 시험하고자하는 샘플에서와 같이 높은 농도)에 걸쳐 분석 물을 적절히 용해시킬 수 있어야합니다. 또한,이 용매는 이상적으로는 "이동상 :"과 유사해야합니다. 용매는 HPLC 기기를 통해 시료를 운반하는 데 사용됩니다.
분석 물질의 "스톡 표준"용액을 만드는 데 필요한 분석 물의 양을 계산하십시오. 이것은 스톡 표준의 요구 농도에 원하는 부피를 곱하여 구합니다. 이 용액에서 분석 물의 농도는 예상되는 가장 높은 샘플 농도보다 10 % 이상 높아야합니다. 청량 음료 샘플에서 예상되는 가장 높은 과당 농도가 8g / 100 밀리리터 인 경우, 표준 표준은 10g 과당 / 100 밀리리터의 농도로 만들 수 있습니다. 적당한 부피는 500 밀리리터이므로 8/100 mL x 500 mL = 40 그램의 과당이 필요합니다.
필요한 양의 분석 물을 적절한 수준의 정밀도로 칭량하십시오. 종종 1 ~ 2 개의 소수점 이하 자릿수까지 정확한 그램 단위의 무게 값이 적합하지만 일부 방법에는 더 정밀해야 할 수도 있습니다.
계량 된 분석 물을 필요한 부피의 부피 플라스크로 옮기고 플라스크의 충전 표시에 원하는 용매를 첨가합니다. 예를 들어 눈금이있는 비이커가 아닌 부피 플라스크를 사용하면 스톡 표준 농도 값의 정밀도가 높아집니다. 모든 분석 물이 플라스크로 옮겨 졌는지 확인하십시오. 필요한 경우 용매를 사용하여 세척하십시오.
부피 플라스크를 막고 분석 물이 완전히 용해 될 때까지 부드럽게 흔들거나 뒤집습니다.
알려진 부피의 스톡 표준을 부피 플라스크로 옮기고 정확한 이송을 위해 피펫을 사용한 다음 용매를 추가하여 스톡 표준의 다양한 희석액을 만듭니다. 최저 표준 농도는 분석 할 예상 최저 샘플보다 낮아야합니다. 청량 음료 예에서, 샘플에서 예상되는 최저 과당 농도가 2g / 100mL 인 경우, 1g / 100mL 표준이 만들어 질 수 있습니다. 이것은 스톡 표준의 10 배 희석에 의해 이루어진다. 표준 시리즈에는 총 5 또는 6 농도가 포함되어야하므로 아마도 3, 5 및 8 그램의 과당 / mL 표준을 생성하기위한 추가 희석이 필요합니다. 이제 HPLC를 교정하는 일련의 표준 솔루션이 있습니다.