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효소에 의해 촉매되는 화학 반응에서, 효소는 기질과 일시적으로 결합하고 그것을 변형 된 상태로 비틀어 주어야하는 활성화 에너지의 양을 낮춘다. 반응에 대한 k (촉매) 또는 "kcat"은 특정 효소가 기질을 생성물 분자로 대사 할 수있는 속도에 대한 농도 독립적 상수를 지칭한다. kcat을 계산하기 위해 과학자들은 먼저 다양한 농도의 기질 ( "효소 분석"이라고 함)을 가진 여러 테스트 튜브를 혼합하고 광 분광 광도계로 일정한 시간 간격으로 테스트하여 생성 분자의 농도를 측정합니다. 그런 다음이 데이터는 그래프에 그려지고 분석됩니다.
초기 속도 계산
효소 분석 첫 번째 테스트 튜브의 데이터에 대한 제품 농도 대 시간 차트를 작성하십시오. 참고 : 가로 축은 "시간"이어야하고 세로 축은 "제품 농도"여야합니다.
섹션 1, 1 단계에서 플로팅 한 데이터 포인트에 대한 선형 회귀선 계산 Excel 및 그래프 계산기는이 선형 모델을 쉽게 결정할 수 있지만 인접한 데이터 간 제품 농도의 차이를 나누어 회귀선 기울기의 추정치를 도출 할 수 있습니다. 그들의 시간 차이로 포인트.
섹션 1, 2 단계의 선형 회귀선 기울기를 "초기 반응 속도 (Vo)"로 기록합니다. 참고 : 회귀선 모델 "= m + b"에서 계수 "m"은 기울기입니다.
분석에서 나머지 시험관에 대해 1, 2, 3 단계를 반복하십시오.
Vmax 계산
각 시험관에 대한 기질 농도의 역수와 초기 반응 속도의 역수를 플로팅합니다 (섹션 1, 단계 4부터). 예를 들어, 초기 기질 농도가 50 마이크로 몰 (uM) 인 시험관의 초기 속도가 80uM / s이면, 기질 농도의 경우 1 / 50uM이고 초기의 경우 1 / 80uM / s입니다. 속도. 참고 : 역 기판 농도는 수평 축에 있어야하고, 초기 초기 속도는 수직 축에 있어야합니다.
참고 : 기질 농도는 수평 축에 있어야하고 초기 반응 속도는 수직 축에 있어야합니다.
섹션 2, 1 단계에서 플로팅 한 차트의 선형 회귀선을 결정합니다. 참고 : 회귀선의 y- 교차를 알아야하기 때문에 섹션 2, 1 단계의 점을 Excel 또는 A에 입력해야합니다. 그래프 계산기와 내장 회귀 모델링 기능을 사용합니다.
1을 선형 회귀선에서 y- 교차로 나눕니다. 이렇게하면 효소의 최대 반응 속도 인 Vmax의 역값을 얻을 수 있습니다. 참고 : 선형 회귀 모형의 형태가 "= m + b"인 경우 "b"의 값은 y- 교차입니다. 1을 "b"로 나눠서 Vmax의 역수를 계산합니다.
1을 섹션 2, 3 단계의 결과로 나눠서 Vmax의 실제 값을 계산하십시오.
원래 분석에서 효소의 농도를 결정하십시오 (원시 데이터 참조). 참고 : 효소 농도는 모든 테스트 튜브에서 동일합니다. 분석에서 기질 농도 만 변한다.
Vmax (섹션 2, 단계 4)를 효소 농도 (섹션 2, 단계 5)로 나눕니다. 결과는 Kcat의 가치입니다.